利用赛业生物AI-AAV平台，通过构建高库容突变体质粒文库、包装病毒文库、NGS测序，搭建DualConvLSTM网络构建AAV2产量预测模型，经在测试集上验证模型可信度较高，相关性已达Pearson=0.929，Spearman=0.859（图1）；AI构建的视网膜靶向性模型，在测试集上相关性达Pearson=0.874，Spearman=0.871（图2）。

利用产量模型和视网膜靶向性AI模型预测产量和表达能力综合评分高的变体，挑选Top序列，构建RC突变体质粒与AAV2野生型质粒、7M8质粒分别包装Luciferase病毒，经病毒包装、纯化、QPCR滴度检测，3个变体的产量均高于AAV2和AAV2.7M8，其中PM054产量最高为AAV2的3.48倍，PM021和PM077产量分别是AAV2的1.5倍和2.01倍。

将包装的Luciferase病毒玻璃体腔注射小鼠，注射剂量为3E+9vg/只眼，3W后通过活体成像和化学发光法检测Luciferase表达情况。活体成像（图4）显示，3个变体Lucifersae信号强度均高于AAV2和AAV2.7M8。为了对其进行更准确的定量，处死小鼠摘取眼球，匀浆后进行化学发光检测，PM054变体Lucifersae表达量最高，为AAV2的15倍，PM021和PM077分别为AAV2的12.5倍和10倍。

为了进一步验证变体体内感染效果并探究感染的细胞类型，包装EGFP病毒，玻璃体腔注射小鼠（3E+9vg/只眼），3W后通过活荧光眼底拍照检测EGFP整体表达情况，摘取眼球进行病理检测。眼底拍照结果（图6）显示，PM054的GFP信号最强，3种变体荧光信号均显著高于AAV2和AAV2.7M8。

对眼球冰冻切片进行DAPI染色，结果显示，3种突变体的感染范围均大于AAV2-WT和AAV2.7M8，其中PM021和PM054几乎可以感染整圈视网膜区域。从感染层次看，AAV2-WT仅感染RGC层细胞，AAV2.7M8具有一定的穿透能力，可穿透至视网膜后层感染少量的视神经细胞。3种变体穿透能力均强于AAV2-WT和AAV2.7M8，能感染视网膜从RGC到PRC的各层细胞，其中PM054对视神经细胞的感染率和表达效果最好，感染视网膜后层的能力约为AAV2.7M8的10倍。