血友病（Hemophilia）是一组遗传性凝血功能障碍的出血性疾病，其共同的特征是活性凝血活酶生成障碍，凝血时间延长，患者有轻微创伤后的出血风险，重症患者甚至在无明显外伤时也可发生“自发性”出血。作为一种X连锁隐性先天性罕见病，血友病多发于男性人群，全球约每3万名新生男婴中就有1人患血友病B[1]。
血友病B由F9(FIX)基因突变导致
目前患病人群较多的血友病类型集中于血友病A和血友病B，血友病A患者因F8(FVIII)基因突变而缺乏第8凝血因子（Factor VIII），血友病B则是因F9(FIX)基因突变而缺乏第9凝血因子（Factor IX）所致。F9基因编码维生素K依赖性的丝氨酸蛋白酶（IX因子），该因子在内源性凝血途径中起着关键作用。IX因子作为一种无活性的酶原在血液中循环，经XIa因子切除激活肽而转化为活性形式IXa。凝血因子IX在凝血级联反应中通过与Ca2+离子、膜磷脂和VIII因子的相互作用来激活因子X（图1），当VIII和IX因子水平≥正常值的50%时人体内可正常止血[2]。F9基因缺失可导致IX因子不足的凝血障碍，引发伴X染色体隐性遗传的B型血友病。
图1 凝血途径示意图[2]
血友病B的严重程度通常与血浆中IX因子的活性水平相关。轻度血友病患者（IX因子活性>5%，>0.05 IU/mL）不会出现自发性出血，但创伤或术后的出血量有所增加；中度血友病患者（IX因子活性为1%-5%，0.01-0.05 IU/mL）很少发生自发性出血，但即使是轻微外伤也会引起长时间出血；重度血友病患者（IX因子活性<1%，<0.01 IU/mL）会出现自发性出血、软组织或关节出血以及严重的皮下血肿[3]。据美国疾病预防控制中心（CDC）统计，重度血友病患者占所有确诊血友病B患者的30%-40%[4]。
F9基因敲除模型构建
赛业生物利用基因编辑技术敲除了小鼠F9基因的1~8号外显子，构建了F9 KO（产品编号：C001509）小鼠模型。该模型出现了凝血功能障碍等血友病B相关表型，可用于研究人类血友病B的遗传机制和临床表型，助力治疗药物的开发、筛选和评价。
F9 KO模型验证数据
(1)F9 KO小鼠F9 mRNA表达缺失
图2 F9 KO小鼠和野生型小鼠（WT）的F9 mRNA表达量检测
RT-qPCR检测结果显示，F9 KO小鼠的肝脏和胆囊中均不存在F9 mRNA的表达，基因编辑模型构建成功。
(2)F9 KO小鼠凝血四项指标的异常提示小鼠存在凝血功能障碍
图3 F9 KO小鼠和野生型小鼠（WT）的凝血四项指标
结果显示，与野生型小鼠相比，F9 KO小鼠的活化部分凝血活酶时间（APTT）显著延长，说明小鼠出现凝血功能障碍，出血时间延长，与经典F9 KO疾病模型的表型相似[5]。此外，F9 KO小鼠凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）和纤维蛋白原（FIB）与野生型小鼠相比无显著差异，符合临床血友病B患者凝血指标的变化特征[6]。
参考文献：
[1]Goodeve AC. Hemophilia B: molecular pathogenesis and mutation analysis. J Thromb Haemost. 2015 Jul;13(7):1184-95.
[2]Merck Manuals Professional Edition. Hemophilia - Hematology and Oncology - MSD Manual Professional Edition. [Online] Available at: https://www.msdmanuals.com/en-in/professional/hematology-and-oncology/coagulation-disorders/hemophilia [Accessed 12 Dec. 2023].
[3]Soroka AB, Feoktistova SG, Mityaeva ON, Volchkov PY. Gene Therapy Approaches for the Treatment of Hemophilia B. International Journal of Molecular Sciences. 2023; 24(13):10766.
[4]Centers for Disease Control and Prevention. Community Counts Registry Report – Males with Hemophilia 2014–2017. [Online] Available at: https://www.cdc.gov/ncbddd/hemophilia/communitycounts/registry-report-males/diagnosis.html
[5]Wang L, Zoppè M, Hackeng TM, Griffin JH, Lee KF, Verma IM. A factor IX-deficient mouse model for hemophilia B gene therapy. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Oct 14;94(21):11563-6.
[6]Thrombosis and Hemostasis Group, Hematology Society of Chinese Medical Association; Hemophilia Treatment Center Collaborative Network of China. [Consensus of Chinese expert on the diagnosis and treatment of hemophilia (version 2017)]. Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 2017 May 14;38(5):364-370. Chinese.
