到了，到了，等待数月的基因编辑鼠终于到了，鉴定工作是时候排上日程了。毕竟鉴定工作做不好，后续繁殖建系以及实验只能灰飞烟灭，重头再来。今天我们要讲的主题就是如何来鉴定CRISPR/Cas构建的基因编辑鼠。
 
我们通常拿到手的基因编辑鼠是F1代杂合阳性鼠，杂合阳性鼠自交的后代会有三种表型（野生型，纯合子，杂合子），需要鉴定纯杂合。小赛就给大家讲一讲不同类型的基因编辑鼠F1代及以后的基因型鉴定。
 
(1) F1代阳性杂合鼠（＋/－）鉴定
● 引物设计
将引物设在敲除片段的两端，野生型小鼠可以扩增出KO鼠缺失的片段。不过需要注意的是，若敲除的片段过大，有的酶是扩增不出来野生型片段的，比如有的酶，1.5K以下基本可以P出条带，大于1.5K的大部分是P不出条带的。

● 预期片段大小
假设条带1的大小为：扩增的野生型片段大小
条带2的大小为：扩增的野生型片段大小-敲除片段大小

● 电泳结果
若是电泳结果有条带2，则为F1代阳性杂合鼠（＋/－）；
若是电泳结果没有条带2，则为为阴性鼠或野生型鼠（＋/＋）。

 
(2) F2代纯杂合鉴定
● 引物设计
若是所用的酶可以扩增出野生型的片段，用（1）中的这对引物就可以鉴定出纯杂合；当敲除的片段过大，而所用的酶无法扩增野生型的条带时，（1）中的这对引物是不能鉴定F2代纯杂合的，所以需要再设计一条引物位于敲除片段内（靠近5’端或是3’端），三条引物一起扩增后电泳。

● 预期片段大小
假设条带1的大小为：扩增的野生型片段大小
条带2的大小为：扩增的野生型片段大小-敲除片段大小
条带3的大小为：引物F与引物Wt/He-R扩增的片段大小

● 电泳结果
野生型的片段可以扩增出来时：
若是电泳结果只有条带2，则为纯合敲除鼠（－/－）；
若是电泳结果只有条带1，则为野生型鼠（＋/＋）；
若是电泳结果既有条带1又有条带2，则为F1代阳性杂合鼠（＋/－）。

野生型的片段不能扩增时：
若是电泳结果只有条带2，则为纯合敲除鼠；
若是2，3两种条带都有，则为杂合敲除鼠；
若是只有条带3，则为野生型鼠。