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HFD+CCl4诱导的代谢障碍相关性脂肪肝炎MASH（NASH）模型
代谢功能障碍相关性脂肪肝炎（MASH），之前称为非酒精性脂肪肝炎（NASH），是一种慢性肝脏疾病。这种疾病通常源于代谢障碍相关性脂肪肝病（MASLD）、肥胖或糖尿病等，导致肝脏脂肪积累，异常的脂肪堆积可进一步引起炎症。如果没有及时干预会发展成肝脏纤维化，可能会进展为肝硬化或肝癌（HCC）[1]。
HFD+CCl4诱导的MASH（NASH）小鼠构建方式
60%的高脂饮食（HFD）饲养12周的C57BL/6小鼠呈现肥胖、高血脂等症状，通过为期4周的CCL4诱导可使肝脏发生纤维化病变。Resmetirom（瑞司美替罗）每天灌胃治疗四周后，可显著降低高血脂、肝脏脂质堆积、纤维化等表型。
图1. HFD+CCl4诱导的MASH（NASH）小鼠研究概况
HFD+CCl4诱导的MASH（NASH）小鼠药效数据
图2. 给药期间小鼠体重的变化曲线及试验终点肝重指标。HFD诱导12-16周的小鼠体重和肝重均升高，其中体重可达40g以上。治疗四周后，Resmetirom可显著降低动物体重和肝重。*P<0.05，与高脂饮食对照组差异显著。数据表示为平均值±标准误。*P<0.05视为具有统计学意义，采用单因素方差分析。
图3. 小鼠总胆固醇（TC）水平、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。HFD诱导的小鼠均可显著提高血清中TC、HDL-C和LDL-C的水平，治疗中期和试验终点Resmetirom可降低由高脂饮食诱导的血清中TC、HDL-C和LDL-C的水平。数据表示为平均值±标准误，n=5。#P<0.05、## P<0.005和####P<0.001与正常饮食对照组比较；*P<0.05、**P<0.005与高脂饮食+CCL4组比较，采用单因素方差分析。
图4. 丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平及天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。治疗期间给予CCL4后检测肝功指标，发现CCL4显著提高了ALT和AST的水平，治疗组的Resmetirom降低了CCL4诱导的血清中ALT和AST水平。数据表示为平均值±标准误，n=5。#P<0.05、## P<0.005与正常对照组比较；*P<0.05、**P<0.005与高脂饮食+CCL4组比较，采用单因素方差分析。
图5. 小鼠肝脏病理组织学检测结果：HE染色、NAS评分、ORO染色与PSR染色。4周治疗后，Resmetirom保护了HFD和HFD+CCL4诱导的肝脏脂肪变性和气球样变。蓝色箭头表示脂肪变性，绿色箭头表示小叶炎，黑色箭头表示气球样变。脂肪变性（0-3分）、小叶炎症（0-3分） 、气球样变（0-2分）、NAS评分（0-8分）。数据表示为平均值±标准误，n=5。
图6. 肝α-平滑肌肌动蛋白 α-SMA(Acta2)mRNA及一型胶原蛋白（Collagen 1α1） mRNA的水平表达。4周治疗后，Resmetirom抑制了由HFD+CCL4显著诱导的肝纤维化标志物的mRNA水平。数据表示为平均值±标准误，n=5。*P<0.05，**P<0.005，****P<0.001，采用单因素方差分析。
HFD+CCl4诱导的MASH（NASH）小鼠实验结论
高脂饮食（HFD）诱导12周的小鼠（DIO）较普通饲料喂养的小鼠增加了体重和肝脏的重量。DIO小鼠血清中的TC、HDL-C和LDL-C的水平显著增加，较好地模拟了MASH的症状。DIO小鼠与四氯化碳（CCL4）的组合可以加速和恶化MASH小鼠模型的病理过程，HFD+CCL4组较HFD组显著升高了血清中ALT和AST的水平，代表CCL4诱导肝脏发生了进一步的损伤。CCL4缩短了诱导时间，并加重了DIO小鼠肝纤维化。这种模型广泛用于临床前药效研究以评估新药对MASH的治疗和保护作用。Resmetirom对DIO+CCL4诱导的MASH模型具有保护和治疗作用，可以有效减少脂肪变性和纤维化。
参考文献
[1] Shuang Wang and Scott L. Found in Translation – Fibrosis in Metabolic Dysfunction-Associated Steatohepatitis (MASH). Sci Transl Med. 2023 Oct 4; 15(716).
