赛业生物培养了一批眼科精细化操作技术人才,可熟练掌握活体眼部检测技术,如荧光眼底成像、眼前节拍照、光学相干断层扫描(OCT)、视网膜电图(ERG)、闪光视觉诱发电位(F-VEP)、荧光素眼底血管造影(FFA) 、激光光凝术、视觉水迷宫、视觉明暗箱、OptoTrack小动物视觉刺激动态跟踪等。
眼部活体检测
图2. 眼球注射AAV-CMV-GFP效果展示(视网膜下和玻璃体腔注射表达GFP的AAV后3周进行检测,眼底可见较强GFP信号,铺片结果可见视网膜下注射后视网膜、RPE和脉络膜区域均见较强GFP信号,玻璃体腔注射后再视网膜靠神经节细胞层区域见较强GFP信号)
视力行为学分析
视动反应测试(OMR)
视动系统提供了一个理想的方法来评价未训练动物的视觉功能。该系统的原理是当活动的图案刺激了动物的视野时,动物会产生自我运动的感觉,即为了减少视网膜上所成物像的移动,哺乳动物的眼睛、头部和身体就会自然地跟随眼睛凝视的方向(运动的物体)移动,称为补偿性头部、身体运动(OMR)或眼球运动(OKR)反应,该反应是持续存在的,故利用该反应进行视锐度的测量。
图3. 小鼠视动反应测试示意图(与野生型相比,pde6b突变小鼠的OMR值明显降低)。
黑白箱
在明暗箱中,大小鼠喜欢在暗箱活动,但动物的探究习性促使其去探究明箱。然而,明箱的亮光刺激又抑制动物在明箱的探究活动。
图4. 小鼠明暗箱测试示意图(与野生型相比,pde6b突变小鼠在暗箱中时长明显减少)。
视觉梯形水迷宫(Visual Water Task)
我们使用选择任务来评估视觉能力,在Y字臂的末端放置两台计算机显示器,一台显示器显示垂直光栅(有条栅的显示屏正下方有隐匿逃生平台),另一台显示器显示相同平均亮度的均匀灰屏,光栅和灰屏随机出现在两台显示器上,训练大小鼠向屏幕方向游去并建立平台与条栅的偶联。这是一种视觉引导水迷宫的测试,需要对视觉信息进行认知处理,将光栅与隐藏平台相联系,使小鼠能从水箱中逃脱,该实验提供了一种可靠、有效、简便地测量视锐度的方法。
图5. 小鼠视觉水迷宫测试示意图(与野生型相比,pde6b突变小鼠找到逃生平台的时间显著增长)。
视觉放置反应测试
将小鼠尾巴提起至笼盖上方15cm高处,缓慢靠近金属笼盖,使小鼠头部接近笼盖但胡须不触及笼盖(整个下降过程需要的时间为1-2秒)。由于本能反应,正常视力小鼠在此状态下会抬头,努力将前肢探向笼盖,这称为“放置反应”,但视力受损的小鼠由于不能看见笼盖对该测试敏感性较低,不易产生反应。根据动物的反应对小鼠评分:0分表示完全没有放置反应,1分表示有微弱的放置反应,2分表示明显有放置反应。测试重复三次,求平均值评价小鼠的视觉性放置反应结果。
图6. 小鼠放置反应测试示意图