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专业的眼科药效学分析平台

赛业生物专业的眼科药效学分析平台可为您提供从眼部注射给药、眼部活体检测、眼部组织取材、到病理学分析和基因与蛋白表达分子检测等全流程的眼科药效学分析服务,为您解决眼科基因治疗困境。

精细化眼部注射给药

赛业生物培养了一批眼科精细化操作技术人才,能进行小鼠视网膜下注射、玻璃体腔注射和结膜下注射等高难度给药方式。
图1. 四种眼部注射方式示意图(在C57小鼠眼球上使用hamilton微量注射器进行不同方式注射,注射物为可见染料)

眼部活体表型检测

赛业生物培养了一批眼科精细化操作技术人才,可熟练掌握活体眼部检测技术,如荧光眼底成像、眼前节拍照、光学相干断层扫描(OCT)、视网膜电图(ERG)、闪光视觉诱发电位(F-VEP)、荧光素眼底血管造影(FFA) 、激光光凝术、视觉水迷宫、视觉明暗箱、OptoTrack小动物视觉刺激动态跟踪等。

眼部活体检测

图2. 眼球注射AAV-CMV-GFP效果展示(视网膜下和玻璃体腔注射表达GFP的AAV后3周进行检测,眼底可见较强GFP信号,铺片结果可见视网膜下注射后视网膜、RPE和脉络膜区域均见较强GFP信号,玻璃体腔注射后再视网膜靠神经节细胞层区域见较强GFP信号)

视力行为学分析

视动反应测试(OMR)
视动系统提供了一个理想的方法来评价未训练动物的视觉功能。该系统的原理是当活动的图案刺激了动物的视野时,动物会产生自我运动的感觉,即为了减少视网膜上所成物像的移动,哺乳动物的眼睛、头部和身体就会自然地跟随眼睛凝视的方向(运动的物体)移动,称为补偿性头部、身体运动(OMR)或眼球运动(OKR)反应,该反应是持续存在的,故利用该反应进行视锐度的测量。
图3. 小鼠视动反应测试示意图(与野生型相比,pde6b突变小鼠的OMR值明显降低)。
黑白箱
在明暗箱中,大小鼠喜欢在暗箱活动,但动物的探究习性促使其去探究明箱。然而,明箱的亮光刺激又抑制动物在明箱的探究活动。
图4. 小鼠明暗箱测试示意图(与野生型相比,pde6b突变小鼠在暗箱中时长明显减少)。
视觉梯形水迷宫(Visual Water Task)
我们使用选择任务来评估视觉能力,在Y字臂的末端放置两台计算机显示器,一台显示器显示垂直光栅(有条栅的显示屏正下方有隐匿逃生平台),另一台显示器显示相同平均亮度的均匀灰屏,光栅和灰屏随机出现在两台显示器上,训练大小鼠向屏幕方向游去并建立平台与条栅的偶联。这是一种视觉引导水迷宫的测试,需要对视觉信息进行认知处理,将光栅与隐藏平台相联系,使小鼠能从水箱中逃脱,该实验提供了一种可靠、有效、简便地测量视锐度的方法。
图5. 小鼠视觉水迷宫测试示意图(与野生型相比,pde6b突变小鼠找到逃生平台的时间显著增长)。
视觉放置反应测试
将小鼠尾巴提起至笼盖上方15cm高处,缓慢靠近金属笼盖,使小鼠头部接近笼盖但胡须不触及笼盖(整个下降过程需要的时间为1-2秒)。由于本能反应,正常视力小鼠在此状态下会抬头,努力将前肢探向笼盖,这称为“放置反应”,但视力受损的小鼠由于不能看见笼盖对该测试敏感性较低,不易产生反应。根据动物的反应对小鼠评分:0分表示完全没有放置反应,1分表示有微弱的放置反应,2分表示明显有放置反应。测试重复三次,求平均值评价小鼠的视觉性放置反应结果。
图6. 小鼠放置反应测试示意图

分子病理表型验证

赛业生物专业的眼科药效学分析平台除了提供眼部注射给药和活体表型检测外,同时积累了包括眼科专业采样技术(如角膜、晶状体、视网膜、RPE、脉络膜+巩膜、视神经组织取材),以及专业病理及分子检测技术(如Western Blot,qPCR,ELISA,视网膜/脉络膜铺片、视网膜切片、H&E染色、免疫组化、免疫荧光等)等全流程的眼科药效学分析服务,为您解决眼科基因治疗困境。

眼部组织取材

图7. 小鼠视网膜铺片(左)和RPE&脉络膜复合体铺片(右)。

病理学分析

视网膜/角膜铺片及切片、常规染色、免疫组化、免疫荧光等。
图8. 部分病理染色结果示例(左上-小鼠眼球玻璃体腔注射AAV-CMV-GFP后3周铺片GFP镜检结果;中上-小鼠进行CNV激光造模后D7进行脉络膜铺片IB4染色结果;右上-CNV造模后脉络膜单个激光点双标染色IB4+Collagen I+DAPI;左下-C57小鼠眼球H&E染色20×;中下-C57小鼠眼球视网膜H&E染色400×;右下-视网膜双标染色RPE65+CHX10+DAPI)
图9. 特异性抗体标记视网膜不同类型细胞的免疫荧光示例结果。

基因与蛋白表达分子检测

取材眼球组织进行Western Blot、qPCR和ELISA等检测蛋白/基因的表达水平。
图10. 小鼠视网膜WB检测(左-GFAP)和qPCR检测(右-扩增曲线)。