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基因敲除小鼠
基因敲除小鼠是指通过基因工程的方法使小鼠体内某种或全部基因功能缺失的小鼠模型，通常包括完全性基因敲除（KO）小鼠和条件性基因敲除（CKO）小鼠。赛业生物可采用TurboKnockout®基因打靶技术制作基因敲除小鼠。
如何选择基因敲除与条件性敲除小鼠？
| 完全性基因敲除小鼠 | 条件性基因敲除小鼠 | |
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应用 |
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优势 |
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劣势 |
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完全性基因敲除小鼠
完全性基因敲除（Knockout，KO）小鼠，也叫全身性基因敲除小鼠，是通过基因敲除技术，把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或者功能区域敲除掉，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠是通过TurboKnockout®技术把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或功能区域敲除掉，使得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因。建立在传统基因打靶技术之上的TurboKnockout®基因编辑技术，不仅具有传统ES打靶技术成熟、修饰准确、效果稳定等优点，更是使得传统ES打靶技术减少两代繁育时间，周期快至4个月，是大片段基因修饰等复杂模型的首选构建方式。
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠的建系原则与流程：
- 1.去除抗性基因Neo：选择阳性TurboKnockout®小鼠与野⽣型小鼠杂交，自删除Neo，获得去除打靶载体中的Neo基因的F1代杂合子KO（+/-）小鼠。
- 2.再挑选⼀对F1代杂合子KO小鼠（+/-）进行自交，通过PCR鉴定筛选得到基因敲除的F2纯合子KO小鼠（-/-）。
条件性基因敲除小鼠
条件性基因敲除（Conditional Knockout，CKO）小鼠，又叫组织特异性敲除小鼠，是通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP和基因编辑技术，实现在特定的组织或细胞中基因敲除，而在其它组织或细胞中该基因表达正常的小鼠模型。与完全性敲除小鼠相比，条件性敲除小鼠可以避免基因胚胎致死的问题，还可以实现基因在特异组织或者特定时间的表达，是精准研究靶基因功能的重要工具。
TurboKnockout®条件性基因敲除小鼠
TurboKnockout®条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的⼀个或几个重要外显子的两端以制备出有两个loxP位点的TurboKnockout®-flox小鼠，TurboKnockout®-flox小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，目的基因表达完全正常；而当TurboKnockout®-flox小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进⾏杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。TurboKnockout®条件性基因敲除小鼠制作周期快至4个月。
TurboKnockout®条件性基因敲除小鼠建系原则与流程：
- 1.与Cre小鼠杂交：TurboKnockout-flox小鼠与组织特异性的Cre小鼠杂交，获得去除Neo抗性且单条染色体有缺失的阳性F1组织特异性flox杂合子小鼠（flox/-）。
- 2.挑选⼀对F1代小鼠（flox/-）进⾏自交，通过PCR鉴定筛选得到组织特异性敲除基因的F2代flox纯合子小鼠（-/-）。
备注
- 诱导型的Cre工具鼠，需要加药后才能实现特异组织删除。
- 有生殖细胞泄露风险的Cre工具鼠，繁殖时按照建议性别选择不同基因型小鼠。
- F1代若有剩余的flox杂合小鼠（flox/+），或想要加快获得目标小鼠，第2步可以用flox/+直接配Cre工具鼠，可缩短⼀代周期。
基因敲除小鼠服务案例文献精选
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