基因编辑大鼠

• SD大鼠：产仔多、生殖力强 、⽣长发育快、抗病能力强。自发肿瘤率低，对性激素感受性高。常用作营养学、内分泌学和毒理学等方面的研究。
• Wistar大鼠：性周期稳定，繁殖力强，生长发育快。性情温顺，抗病性强，⾃发肿瘤率低。广泛用于营养学、⽣理学、药理学、毒理学及病理生理学等的研究。
• F344（CDF）大鼠：旋转运动性差，血清胰岛素含量低，脑垂体大。可允许多种肿瘤移植生长，癌症发生的研究中应用较多。
• Wistar大鼠：性周期稳定，繁殖力强，生长发育快。性情温顺，抗病性强，⾃发肿瘤率低。广泛用于营养学、⽣理学、药理学、毒理学及病理生理学等的研究。
• Brown Norway大鼠：野生Norway大鼠的变种，毛呈褐⾊，最早用于遗传学研究。对实验性过敏性脑脊髓炎及自身免疫性复合型肾小球肾炎有抗性。

完全性敲除大鼠的建系原则与流程:

1. 1.
   通过构建打靶载体，并将载体显微注射至受精卵，获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠。
2. 2.
   F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子大鼠。
3. 3.
   选择来自同一只F0代大鼠，基因型一致的F1代大鼠，达到性成熟后进行互配，可获得F2代大鼠。对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代大鼠中25%为纯合子，50%为杂合子，25%为野生大鼠。

条件性敲除大鼠的建系原则与流程:

1. 1.
   与野生型大鼠杂交：阳性CRISPR-Pro大鼠（+/flox）与野生型大鼠（+/+）杂交，获得F1代杂合子大鼠（+/flox）。
2. 2.
   挑选一对F1代杂合子大鼠（+/flox）进行自交，获得F2代纯合子大鼠（flox/flox）。

基因敲入大鼠的建系原则与流程:

1. 1.
   通过构建打靶载体，并将载体显微注射至受精卵，获得测序鉴定阳性的F0代杂合子大鼠。
2. 2.
   F0代杂合子大鼠与野生型大鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子大鼠。
3. 3.
   选择来自同一只F0代大鼠，敲入位点一致的F1代大鼠，达到性成熟后进行同胞交配，可获得F2代大鼠。
4. 4.
   对获得的F2代大鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代大鼠中25%为敲入位点一致的纯合子大鼠，有50%为只有一条染色体敲入的杂合子大鼠，有25%为野生型大鼠。

转基因大鼠建系原则与流程:

1. 1.
   原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子大鼠。原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到大鼠的基因组，首代转基因大鼠（F0）将会有不同的整合位点，整合基因的拷贝数可能在不同的首代转基因大鼠中也不同。因此，每只F0代大鼠需要作为一个独立的谱系研究，并且与其它F0代大鼠分开进行繁殖。
2. 2.
   F0代大鼠达到性成熟后（8周）与野生型大鼠进行交配，获得F1代大鼠。
3. 3.
   对交配获得的F1代大鼠进行基因型鉴定，理论上，F1代大鼠中有50%为转基因杂合子大鼠，50%为野生型大鼠。

注意事项:

• 每只F0代鼠基因型都不一样，不能进行F0之间的自交，只能先与野生型交配，筛选出基因型一致的F1。（假如F0代有多个位点的外源基于整合，F1还有可能有多种基因型）。
• 获得F1鼠后，可以进行蛋白表达鉴定，优先筛选出表达的鼠后再进行后续的传代和保种。