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HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠
共同轻链抗体小鼠（common light chain antibody mouse）是一种经过基因工程改造的小鼠模型，设计用于产生具有共同轻链的人源化抗体。通过基因改造，让所有产生的抗体共享相同的轻链，这种设计能够应用于双特异性或多特异性抗体的开发。HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠能够在体内产生具有高亲和力和低免疫原性的全人源抗体，极大加快抗体发现和新药研发过程，这一点已经得到了多家跨国药企、生物制药公司、科研学术机构的验证。
品系名称：全人源共同轻链抗体小鼠
品系简称：HUGO-Light™
品系背景：C57BL/6NCya、BALB/cAnCya
毛色：黑色、白色
用途：全人源固定轻链单克隆抗体开发
HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠抗体基因结构示意图
该品系小鼠（i）重链使用HUGO-Mab™小鼠重链，可变区替换为人源VDJ可变区全长序列；（ii）Kappa轻链经TurboKnockout® ES打靶技术改造，使得小鼠Kappa light chain可变区固定仅表达1个VJ可变区组合；（iii）Lambda light chain完全缺失。
图1. HUGO-Light™全人单克隆抗体小鼠抗体基因结构示意图
结合重链与轻链的配对频率，筛选出来8个轻链基因，HUGO-Light™小鼠轻链仅表达一组固定的人源轻链基因VJ序列，总计构建了8种HUGO-Light™小鼠模型。同时赛业基因也开发了另一类模型，在小鼠轻链插入4个高频的轻链V基因及1个J基因，总计构建了2种HUGO-Light™小鼠模型。两类产品共计10种小鼠（见表1）。
表1. 共同轻链抗体鼠产品
| 第一类 | 第二类 | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 共同轻链产品 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 物种 | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya | C57BL/6NCya |
| 技术 | ES重组 | ES重组 | ES重组 | ES重组 | ES重组 | ES重组 | ES重组 | ES重组 | ES重组 | ES重组 |
| 重链可变区 | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL | 全人源FL |
| 轻链λ | KO | KO | KO | KO | KO | KO | KO | KO | KO | KO |
| 轻链κ V | 人源IGKV1-39 | 人源IGKV3-20 | 人源IGKV1-5 | 人源IGKV1-33 | 人源IGKV2-28 | 人源IGKV4-1 | 人源IGKV3-15 | 人源IGKV3-11 | IGKVnx4 | IGKVnx4 |
| 轻链κ J | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn | 人源IGKJn |
| 轻链κ C | mouse | mouse | mouse | mouse | mouse | mouse | mouse | mouse | mouse | mouse |
| 轻链κ 插入位点 | Kappa | Kappa | Kappa | Kappa | Kappa | Kappa | Kappa | Kappa | Kappa | Kappa |
HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠品系特点
固定轻链基因，
只允许重链可变
只允许重链可变
免疫功能健全
B细胞功能正常
保留了天然的
抗体功能
抗体功能
HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠免疫建议
建议免疫周龄：6-8w
健康级别：Specific Pathogen Free (SPF)
HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠模型优势
- 基于赛业自主研发的TurboKnockout® ES打靶技术。
- 品系涵盖重链与轻链配对频率最高的8个基因，产品库齐全。
- 重链为全人源抗体序列，多样性丰富。
- C57BL/6和BALB/c背景品系均可提供，适合多类靶点开发。
HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠模型验证数据
HUGO-Light™小鼠能够在体内产生具有高亲和力和低免疫原性的全人源化抗体，在功能活性方面优于FDA批准的标准疗法。
1. 抗体序列多样性检测
以其中IGKV1-39基因模型举例分析，采集Naive状态小鼠的脾脏，提取脾脏RNA，对样本提出的total RNA检测合格后，进行文库构建，结合高通量测序技术，全面评估免疫系统的多样性。对测序得到的序列采用质控软件进行质量控制并过滤测序背景，然后与IMGT免疫细胞受体库的V(D)J基因比对，搜索相应的基因片段，寻找精确的VDJ基因片段和序列的位点，统计分析VDJ基因频率，克隆频率分布，多肽序列数目和CDR3长度分布等信息。
图2. HUGO-Light™小鼠脾脏B细胞中重链抗体序列VDJ重排表达检测。对Naive状态小鼠脾脏RNA进行建库，测序分析重链抗体可变区序列多样性，结果表明HUGO-Light™小鼠重链抗体可变区序列多样性丰富，且各个家族使用频率与人体中重链抗体家族使用频率类似。
2. 免疫细胞检测
以其中HUGO-Light™ （Vk1-39）基因模型举例分析：采集Naive状态小鼠的脾脏及外周血，将细胞置于含封闭抗体（如Fc Block）的溶液中孵育，防止非特异性结合，按照抗体说明书的推荐浓度加入荧光标记的抗体，在冰上孵育20～30分钟，避免光照，再用PBS缓冲液清洗细胞，去除未结合的抗体。设置好激光器和滤光片参数，确保与抗体荧光匹配，将染色的细胞样品上机，按设置的参数检测荧光信号，使用流式细胞仪软件采集数据，并保存数据文件进行数据分析。
图3. HUGO-Light™小鼠脾脏及外周血中的B、T和NK细胞比例正常。取小鼠的脾脏组织及外周血，对其T、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。检测结果显示HUGO-Light™小鼠脾脏组织中的B细胞（CD3-CD19+）、T细胞（CD3+CD19-）和NK细胞（CD3-CD335+）WT小鼠无明显差异。
3. 抗原免疫
用25-50μg/只剂量的人重组蛋白与弗氏佐剂乳化后对小鼠进行皮下多点免疫，每2周加强免疫一次，野生型小鼠作为对照组。二免，三免，四免后一周均通过眼眶采血采集小鼠血清，通过ELISA方法检测血清中抗体的含量。
图4. HUGO-Light™小鼠免疫反应。包被抗原，1:1000起始梯度稀释血清，加入Anti-mouse IgG Fc二抗进行检测。HUGO-Light™小鼠显示出与野生型C57BL/6N(WT-C57)小鼠相似的抗原特异性血清滴度。以上是两种不同治疗靶抗原A、B的免疫血清数据。
4. 基于微流控的单B细胞抗体筛选
取VEGF165抗原免疫后的HUGO-Light™小鼠脾脏、淋巴结及骨髓细胞，经过CD138 Beads富集后，将获得的2×106个浆细胞包裹在微液滴中培养2小时，单个B细胞分泌的抗体与微液滴中的抗原及二抗结合，在微液滴分选仪中分选出阳性液滴细胞，通过NGS测序获得1444对轻重链配对的抗体序列，其中有189对unique序列。
图5. HUGO-Light™小鼠阳性B细胞筛选。通过微流控仪器将阳性液滴的浆细胞分选出来，再通过NGS测序获得抗体序列。（备注：该数据由赛业生物与百英生物合作完成）。
5. 候选抗体分子的活性检测
从测序获得的189对unique序列中选取20条分子进行抗体的合成及表达，纯化后获得蛋白进行ELISA结合活性检测。
图6. Anti-VEGF165结合活性分析。包被VEGF165抗原，候选抗体100 nM浓度起始5倍梯度稀释，加入Anti-Human IgG HRP 二抗，检测抗体与抗原的结合活性。结果显示HUGO-Light™小鼠产生的抗体分子具有较高的结合亲和力。
想了解更多有关HUGO-Light™全人共轻链抗体小鼠的验证数据，欢迎下载查阅《HUGO-Ab®全人源抗体小鼠》。
