HUGO-Nano™全人纳米抗体小鼠模型验证数据
1. 抗体序列多样性检测
采集Naive状态小鼠的脾脏,提取脾脏RNA,对样本提出的total RNA检测合格后,将下游扩增引物设置于CH2区域,进行文库构建,结合高通量测序技术,全面评估免疫系统的多样性。对测序得到的序列采用质控软件进行质量控制并过滤测序背景,然后与IMGT免疫细胞受体库的V(D)J基因比对,搜索相应的基因片段,寻找精确的VDJ基因片段和序列的位点,统计分析VDJ基因频率,克隆频率分布和多肽序列数目等信息。

图2. HUGO-Nano™小鼠脾脏B细胞中重链抗体序列VDJ重排表达检测。对Naive状态小鼠脾脏RNA进行建库,测序分析重链抗体可变区序列多样性,结果表明HUGO-Nano™小鼠重链抗体可变区序列多样性丰富,且抗体序列缺失CH1序列。
2. 免疫细胞检测
采集Naive状态小鼠的外周血,将细胞置于含封闭抗体(如Fc Block)的溶液中孵育,防止非特异性结合,按照抗体说明书的推荐浓度加入荧光标记的抗体,在冰上孵育20~30分钟,避免光照,再用PBS缓冲液清洗细胞,去除未结合的抗体。设置好激光器和滤光片参数,确保与抗体荧光匹配,将染色的细胞样品上机,按设置的参数检测荧光信号,使用流式细胞仪软件采集数据,并保存数据文件进行数据分析。

图3. HUGO-Nano™小鼠外周血中的B、T和NK细胞比例正常。取HUGO-Nano™小鼠的外周血,对其T、B和NK细胞的组成进行代表性流式细胞免疫表型分析及统计对比。检测结果显示HUGO-Nano™小鼠外周血中的B细胞(CD3-CD19+)、T细胞(CD3+CD19-)和NK细胞(CD3-CD335+)与WT小鼠无明显差异。
3. 抗体活性分析
通过CHO-S细胞真核表达获得的Anti-PD-L1抗体与PD-L1抗原进行ELISA结合活性分析。

图4. 全人源纳米抗体结合活性分析。由ELSIA结果可知,抗PD-L1全人源纳米抗体与PD-L1抗原有不同的结合亲和力活性。