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细胞技术服务
赛业生物可以为您提供各类细胞技术服务,如TransWell侵袭、细胞迁移、流式检测平台可承接的细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡等细胞检测分析服务,在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性。

细胞增殖

赛业生物为您提供基于MTT比色法和Cell Counting Kit的细胞增殖服务。

1.MTT法又称MTT比色法

MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在540或720nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

2.Cell Counting Kit 简称 CCK-8 试剂盒

CCK-8 试剂盒是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下可以被线粒体内的脱氢酶还原成高度水溶性的黄色甲臜产物。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm 波长处测定 OD 值,间接反映活细胞数量。CCK-8目前已广泛应用于高通量药物筛选,细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

细胞周期

细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,称为细胞周期,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。
  1. 1.
    G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间 
  2. 2.
    S期(synthesis phase),指DNA复制的时期 
  3. 3.
    G2期(gap2),指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间 
  4. 4.
    M期又称D期(mitosis or division),细胞分裂开始到结束
PI法是较常见的一种周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。由此可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关,如:小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时,人类胃上皮细胞24小时,骨髓细胞18小时,培养的人成纤维细胞18小时,CHO细胞14小时,HeLa细胞21小时。不同类型细胞的G1长短不同,是造成细胞周期差异的主要原因。

细胞凋亡

细胞凋亡是细胞主动实施的一种程序性死亡,是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。

TransWell侵袭

Transwell是细胞迁移的常用检测方法,细胞迁移也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动,是指细胞在接收到迁移信或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一,是机体正常生长发育的生理过程,也是活细胞普遍存在的一种运动形式。
Transwell实验原理:小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

生长曲线

细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,是判定细胞活力的重要指标。一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期,斜率较大的指数生长期,呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。

克隆形成率

克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量,它反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。在细胞实验中,克隆形成率是评鉴细胞增殖能力的重要指标,赛业生物可以根据您的实验需求,进行细胞的克隆形成率实验。

细胞划痕

细胞划痕(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。划痕实验在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程,是研究细胞迁移的体外试验方法中最简单的方法。